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发布时间：2023-05-01
收藏适用场景： shRNA制备
解决的技术问题： 现有方法存在以下不足之处：一、引物设计过长，容易产生突变，克隆效率低。方法(I)中使用的寡核苷酸单链通常为60-100nt，合成这种长度的寡核苷酸单链不仅合成费用大幅提高，而且碱基合成过程中的错误率也会明显增加，进而增加了重组质粒筛选的工作量，费时费力。二、操作繁琐，不适合高通量构建RNA干扰载体。
说明书概要： 本发明公开一种用于制备shRNA的引物及制备方法、载体及构建方法，用于制备shRNA的引物包括引物P1、P2、P3；P1长度为34nt，从5’端开始，依次为突出的粘性末端ACCG，21nt的siRNA正向序列，loop序列，以及与siRNA正向序列3’末端3个碱基反向互补的碱基；P2，5’端4个碱基由ACCG改变为AAAA，其余序列与P1相同；P3是siRNA正向序列5’末端18nt序列的反向互补序列。三条引物长度均不超过35nt，可有效避免长引物合成过程中发生的碱基错误，提高了shRNA的保真性，成本低，适用于高通量制备shRNA。
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