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发布时间：2023-06-01
收藏适用场景： 建立诱导体系
解决的技术问题： 研究人员致力于rtTA的改良，开发的新体系在一定程度上降低了诱导系统的泄露表达，并提高了诱导效率，但效果有限。Tet-ON诱导表达系统，尤其是利用慢病毒载体建立的诱导体系还有待于改进和发展。
说明书概要： 本发明公开了一种诱导型慢病毒表达体系，包括目的基因表达框和rtTA表达框，所述目的基因表达框包括含有四环素顺式应答作用元件的诱导型启动子及目的基因，所述rtTA表达框包括启动子、rtTA、连接肽以及筛选基因；所述连接肽为P2A连接肽；所述筛选基因为Puro；所述诱导型启动子为TetO6或TRE3G。本发明还公开了一种诱导型慢病毒表达体系的构建方法，步骤为：改建pLVX‑Puro载体；TetON3G基因合成及克隆；pLVX‑rtTA3的构建；亚克隆EF1a启动子；亚克隆红色荧光蛋白RFP；亚克隆含有四环素顺式应答作用元件诱导型启动子TRE3G或TETO6。本发明提供的诱导型表达体系引入细胞后可在保持低背景表达的同时，最大水平地诱导表达目的基因，且对诱导剂反应灵敏、效率高、分子量小，可广泛应用于基因功能研究中。
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